96 kits d'essai de l'essai ELISA pour la reproductibilité élevée de détection de kanamycine

Kanamycine ELISA Test Kit

Description de produit

La kanamycine ELISA Test Kit de ^™ de REAGEN est un immunoessai concurrentiel d'enzymes pour l'analyse quantitative de la kanamycine en viande/foie/rein, lysate de cellules, urine, sérum et lait.

Les caractéristiques uniques du kit sont :

• Hauts récupération (>80%), rapides (10-40 minutes), et méthodes rentables d'extraction.

• La limite de détection est 0,2 ng/g.

• Reproductibilité élevée.

• Une analyse rapide d'ELISA (moins de 1 heures indépendamment du nombre d'échantillons).

Aperçu de procédure

La méthode est basée sur une analyse colorimétrique concurrentielle d'ELISA. La kanamycine-BSA a été enduite dans les puits de plat. Pendant l'analyse, l'échantillon et l'anticorps de kanamycine (anticorps #1) et HRP-conjugué (l'anticorps HRP-conjugué #2) sont ajoutés aux puits pour l'incubation. Si le résidu de kanamycine est présent dans l'échantillon, il concurrencera de la kanamycine sur les puits de plat pour l'anticorps de kanamycine, l'anticorps secondaire, étiqueté avec de l'enzyme de peroxydase, des cibles l'anticorps primaire qui est complexé à la drogue enduite sur les puits de plat. L'intensité en résultant de couleur, après addition du substrat de HRP (TMB), a des relations inverses avec la concentration de résidu de kanamycine dans l'échantillon.

Kit Contents, stockage et durée de conservation

La kanamycine ELISA Test Kit de ^™ de REAGEN a la capacité pour 96 déterminations ou l'essai de 42 échantillons en double (assumant 12 puits pour des normes). Renvoyez tous les microwells inutilisés au sac d'aluminium et rescellez-les avec du déshydratant fourni dans le paquet original. Stockez le kit à 2-8°C *. La durée de conservation est de 12 mois où le kit est correctement stocké.

Si vous ne prévoyez pas d'employer le kit pour plus de 1 mois, l'action standard de kanamycine de magasin, l'anticorps #1and de kanamycine HRP-a conjugué l'anticorps #2 à -20°C ou dans un congélateur.

Sensibilité (limite de détection)

Spécificité (activité hétérospécifique)

Matériaux requis non équipés de kit

• Lecteur de plat de microtitre (450 nanomètre)

• Mélangeur de tissu (par exemple homogénisateur de maître de tissu d'Omni)

• Mélangeur de vortex (par exemple mélangeur de Genie Vortex de VWR)

• pipettes 10, 20, 100 et 1000 d'UL

• Pipette multicanale : 50-300 UL (facultative)

Avertissements et précautions

• Les normes contiennent la kanamycine. Poignée avec soin particulier.
• N'employez pas le kit après la date d'échéance.
• N'entremêlez pas les réactifs de différents kits ou les sorts excepté des composants avec le même numéro de la pièce dans leurs dates d'échéance. LES ANTICORPS ET LES PLATS SONT KIT-AND LOT-SPECIFIC.
• Essayez de maintenir une température de laboratoire de 20°-25°C (68°-77°F). Le fonctionnement Avoid analyse sous ou près des évents, car ceci peut causer le refroidissement, le chauffage et/ou l'évaporation excessifs. En outre, ne courez pas les analyses à la lumière du soleil directe, comme ceci peut causer la chaleur excessive et l'évaporation. Des dessus froids de banc devraient être évités en plaçant plusieurs couches de serviette de papier ou d'un autre matériel d'isolation sous les plats d'analyse pendant l'incubation.
• Assurez-vous que vous employant distillez seulement ou l'eau désionisée puisque la qualité de l'eau est très importante.
• En introduisant à la pipette des échantillons ou des réactifs dans un plat de microtitre vide, placez les astuces de pipette dans le coin inférieur du puits, établissant le contact avec du plastique.
• Des incubations des plats d'analyse devraient être chronométrées aussi avec précision comme possible. Soyez cohérent en ajoutant des normes au plat d'analyse. D'abord et puis ajoutez vos normes vos échantillons.
• Ajoutez les normes pour plaquer seulement dans l'ordre de la basse concentration à la forte concentration car ceci réduira au minimum le risque de compromettre la courbe standard.
• Frigorifiez toujours les plats dans les sacs scellés avec du déshydratant pour maintenir la stabilité. Empêchez la condensation de former des plats en leur permettant d'équilibrer à la température ambiante (20 – 25°C/68 – 77°F) tandis que dans l'emballage.

Soyez sûr que des échantillons sont correctement stockés. Généralement des échantillons devraient être frigorifiés à 2-4°C pendant pas plus de 1-2 jours. Échantillons de gel à un minimum de -20°C s'ils doivent être stockés pendant une plus longue période. Des échantillons congelés peuvent être dégelés aux temps de pièce (20 – 25°C/68 – 77°F) ou dans un réfrigérateur avant emploi.

• Préparation du diluant 1×Sample : Mélange 1 volume de diluant 10×Sample avec 9 volumes d'eau distillée.
• Préparation du tampon 1×Sample extérieur : Mélange 1 volume du tampon 10×Sample extérieur avec 9 volumes d'eau distillée.

Cellule Lysate

• Prenez l'UL 100 du lysate de cellules, ajoutez l'UL 900 du tampon du diluant 1×Sample, mélangez bien.

• Centrifugeuse pendant 5 minutes à 4000 x G.

• Prenez l'UL 50 du surnageant par puits pour l'analyse.

Note : Facteur de dilution : 10.

Chair de crevette/poissons/foie/rein

• À 1,0 g de l'échantillon homogénéisé, ajoutez 4.0mL du tampon 1×Sample extérieur,

• Vortex l'échantillon pendant les minutes 1 avec le mélangeur de vortex.

• Centrifugez l'échantillon pendant 5 minutes à 4 000 x G.

• Transférez soigneusement 200uL de la couche supérieure à un nouveau tube, ajoutez 1.375mldediluanttémoin1Xet25uLdutampond'équilibretémoin, vortexpendant30secondes.

• Employez 50uL par puits pour l'analyse.

Note : Facteur de dilution : 40.

Urine/sérum

• Prenez 50uL d'urine ou l'échantillon de sérum, ajoutent 1,2 ml de diluant témoin 1X, se mélangent bien.

• Centrifugeuse pendant 5 minutes à 4 000 x G.

• Prenez 50uL du surnageant par puits pour l'analyse.

Note : Facteur de dilution : 25.

Lait

• Ajoutez 100uL d'échantillon de lait dans un tube à centrifuger, ajoutez 900uL de diluant témoin 1X.
• Vortex vigoureusement pendant 30 secondes.
• Centrifugeuse à 4 000 x g pendant 10 minutes.
• Employez 50uL de l'échantillon surnageant pour l'analyse.

Note : Facteur de dilution : 10

PROTOCOLE DE KIT D'ESSAI DE LA KANAMYCINE ELISA

Préparation de réactif

IMPORTANT : Tous les réactifs devraient être apportés jusqu'à la température ambiante avant emploi (à 1 – 2 heures 20 – 25°C/68 –°F) 77 ; Assurez-vous que vous section lue de « avertissements et de précautions » aux solutions de la page 3. devriez être disposé juste avant l'essai d'ELISA. Tous les réactifs devraient être mélangés doucement en inversant ou en tourbillonnant avant l'utilisation. Préparez les volumes qui sont nécessaires pour le nombre de puits étant courus. Ne renvoyez pas les réactifs dans les tubes/bouteilles courants originaux. Utilisant les réservoirs jetables quand la manipulation des réactifs peut réduire au minimum le risque de contamination et est recommandée.

• Préparation de solution du lavage 1X

Mélange 1 volume de la solution du lavage 20X avec 19 volumes d'eau distillée.

ELISA Testing Protocol

Marquez les différentes bandes qui seront employés et des réactifs de partie aliquote comme exemple suivant :

• Ajoutez l'UL 50 des normes de chaque kanamycine en double dans différents puits (ajoutez les normes pour plaquer seulement dans l'ordre de la basse concentration à la forte concentration).

• Ajoutez l'UL 50 de chaque échantillon en double dans différents puits témoin.

• Ajoutez l'UL 50 l'UL HRP-Conjuguer Ab#2 à chaque puits et 50 de l'anticorps #1 de kanamycine à chaque puits. Mélangez bien en basculant doucement le plat manuellement pour 30s.

• Incubez le plat pendant 30 minutes à la température ambiante (20 – 25°C/68 – 77°F). (Évitez la lumière du soleil directe et les dessus froids de banc pendant l'incubation. Couvert du plat de microtitre tandis que l'incubation est recommandée).

• Lavez le plat 4 fois avec l'UL 250 de la solution du lavage 1X. Après le dernier lavage, inversez le plat et tapez doucement le sec de plat sur les serviettes de papier (exécutez la prochaine étape juste après des lavages de plat. Ne laissez pas le plat aérer sec entre les étapes de fonctionnement).

• Ajoutez l'UL 100 du substrat de TMB. Chronométrez la réaction juste après ajouter le substrat. Mélangez la solution en basculant doucement le plat manuellement pour 30s tout en incubant (ne mettez aucun substrat de nouveau au conteneur original pour n'éviter aucune contamination potentielle. N'importe quelle solution de substrat montrant la coloration est indicative de la détérioration et devrait être jetée. Couvert du plat de microtitre tandis que l'incubation est recommandée).

• Après incubation pendant 15 minutes à la température ambiante (le°F) 20 – 25°C/68 – 77, ajoutent l'UL 100 du tampon d'arrêt pour arrêter la réaction enzymique.

• Lisez le plat suivant dès que possible l'addition du tampon d'arrêt sur un lecteur de plat avec la longueur d'onde de 450 nanomètre (avant la lecture, employez un chiffon non pelucheux sur le fond du plat pour s'assurer qu'humidité ou empreinte digitale n'interfère pas les lectures).

Calculs de concentration en kanamycine

Une courbe standard peut être construite en traçant l'absorbance relative moyenne (%) a obtenu à partir de chaque norme contre sa concentration dans ng/mL sur une courbe logarithmique.

Absorbance relative (%) = norme zéro ou échantillon X 100 d'absorbance

Employez les valeurs relatives moyennes d'absorbance pour chaque échantillon pour déterminer la concentration correspondante de la drogue examinée dans ng/mL de la courbe standard.

La figure suivante est une courbe standard de chloramphenicol typique.